Acasă > Știri > Știri despre companie

Analiza problemelor comune în exprimarea proteinelor procariote

Timpul de actualizare : 2021-03-04

Sursă :

Vizualizări: 17

Analiza problemelor comune în exprimarea proteinelor procariote

Expresia procariotă se referă la metoda de a construi un vector de expresie și de a introduce o genă țintă străină într-o tulpină de expresie prin tehnologia de clonare a genei, astfel încât să poată fi exprimată într-un organism sau celulă procariotă specifică. Sistemul de expresie a proteinelor procariote este în prezent cea mai frecvent utilizată și cea mai economică metodă de exprimare a proteinelor. Sistemul de expresie Escherichia coli este unul dintre cele mai utilizate sisteme de exprimare a proteinelor procariote.

Escherichia coli expression system Features

Un sistem complet de expresie include, de obicei, vectori de susținere și tulpini de expresie. Dacă este o expresie specială indusă, include și un inductor, iar expresia de fuziune include și un sistem de purificare sau detecție Tag. Alegerea unui sistem de expresie depinde de obicei de scopul experimentului, cum ar fi nivelul de expresie, activitatea proteinei țintă, metoda de purificare a produsului de expresie și așa mai departe. Următoarele introduc probleme comune în procesul de exprimare procariotă.

 

Î: De ce proteina țintă apare întotdeauna sub formă de corpuri de incluziune?

R: În expresia și purificarea procariotă, proteina țintă deseori se pliază greșit și se agregă în corpuri de incluziune. După inducție, expresia proteinei țintă poate ajunge de obicei la mai mult de 50% din proteina celulară totală.

Deși o anumită proporție a proteinei există sub formă solubilă, până la 95% din proteină este prezentă în corpurile de incluziune. Pentru a obține proteine mai solubile, în timpul experimentului, temperatura de inducție poate fi redusă, de exemplu, 16-30 ° C, sau concentrația IPTG (0,01-0,1mM) poate fi redusă și timpul de inducție poate fi prelungit. Un mediu special poate fi folosit și pentru cultivarea bacteriilor.



Î: De ce este dificil să exprimăm proteinele transmembranare?

R: Rata de succes relativ scăzută a expresiei proteinelor transmembranare este o problemă comună. Pot exista două motive principale:

 

1. Proteinele transmembranare sunt în general formate din molecule puternice de aminoacizi hidrofobi și molecule hidrofile care sunt legate într-o manieră săritură pentru a forma cea mai simplă structură chimică transmembranară hidrofilă și hidrofobă, care este similară cu structura peptidelor semnal.

Pentru celulele procariote, organitele simple nu pot completa procesul complex de recunoaștere și excizie a peptidelor semnal, ghidând reticulul endoplasmatic și aparatul Golgi spre reambalare și secretare ca celulele eucariote. Unele proteine traversează membrana de mai multe ori. Pentru celulele procariote Este aproape imposibil ca celula să termine sarcina.


2. Pentru fragmente hidrofobe, corpurile de incluziune sunt ușor formate în expresia celulelor procariote. Peptidele hidrofobe pot inhiba procesul de translație și chiar se pot contopi cu structura membranei procariote pentru a forma toxicitate. În instinctul de auto-protecție biologică, toate organele vor opri procesul de sinteză a proteinelor.

 

Dacă sunteți interesat de acest subiect, vă rugăm să continuați să urmați articolul actualizat al Generalbiosystems despre analiza problemelor comune în expresia proteinelor procariote.